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細胞房工作守則及注意事項

更新時間:2012-02-23      點擊次數(shù):7302
一、 常規(guī)操作
1. 穿著實驗服。自己的白大衣或厚外套,可脫在門外的衣帽架上。
  2. 穿著拖鞋。在緩沖間換下自己的鞋子,盡量避免在緩沖間走動、停留。
  3. 細胞房zui多可4個人同時使用。盡量避免在內長時間逗留、交談。
二、 培養(yǎng)箱使用規(guī)則
1. 從培養(yǎng)箱取放物品前,用酒精清潔雙手(或手套),盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。
  注: 培養(yǎng)箱中的空氣是經過過濾的潔凈空氣。長時間敞開或頻繁開關培養(yǎng)箱,容易造成污染。
  2. 培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精揮發(fā)后再放入,以免培養(yǎng)箱內滯留過多乙醇蒸氣。
  3. 2-3人共用一層培養(yǎng)箱,按預定位置擺放培養(yǎng)器皿,方便查找,以免長時間敞開培養(yǎng)箱。
  4. 普通培養(yǎng)中的細胞,若非實驗需要,每瓶/板細胞每天只需要觀察生長狀態(tài)一次,2人以上共用的細胞,可約好時間一起觀察。
  注:頻繁將細胞拿出觀察,容易給培養(yǎng)箱造成污染,同時也會影響細胞生長條件的恒定。
三、 顯微鏡使用規(guī)則
1. 顯微鏡使用前,用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。
  2. 離開細胞房時或較長時間不需使用時,及時關上電源,延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。
四、 超凈臺相關操作規(guī)則
1. 超凈臺使用遵循預約原則。無預約者若有必要在他人預約時段內使用,需先征得預約者的同意,否則應無條件讓出工作臺,以免耽誤他人實驗。
2. 超凈臺使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒,所有物品放入超凈臺內使用前均應消毒。
3. 點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠,液面應占瓶高1/3-2/3。
  注: 消毒用75%的酒精,酒精燈用95%的酒精,向噴壺或燈內添加酒精時請留意。
  注: 酒精和酒精棉球由值日生負責補給,發(fā)現(xiàn)細胞房內存放量不足時請及時通知值日生。
4. 超凈臺中應擺放廢液杯和廢品杯各一只,用于暫時存放廢棄物,實驗結束后將杯內垃圾倒入水池或垃圾桶中,并沖洗晾干備用。
  注: 將廢棄的槍頭、管子內的殘留液體打(倒)入廢液杯后再棄入廢品杯中,以免垃圾桶內留有大量培養(yǎng)液滋生細菌。
5. 可回收的移液管、離心管、培養(yǎng)瓶皿等,放入裝有清水的塑料桶中浸泡,桶內需有足量的清水以沒過浸泡物品。
  注: 可回收器皿必要時先初步涮洗后再放入桶內,尤其是培養(yǎng)瓶或血清管中有大量高營養(yǎng)的液體殘留時,容易使桶內的清水長菌。
  保證浸泡的瓶、管內*被清水充滿,而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底。
  塑料桶內物品由值日生每天負責送去清洗,使用者實驗結束后若發(fā)現(xiàn)桶已裝滿,請通知值日生或順手將塑料桶帶出細胞房。
6. 裝培養(yǎng)液的瓶子、配培養(yǎng)液的器皿勿放入塑料桶內浸泡!應由使用者本人及時清洗晾干備用。
  注: 因桶內物品通常要浸泡幾小時以上才送去清洗,此時細菌可能已在桶中生長并釋放內毒素。細菌內毒素很難通過常規(guī)濕熱滅菌步驟去除干凈,即使干烤也不能保證其*失活。內毒素對細胞生長及多種實驗均有較大影響。
洗滌程序:洗潔精洗凈,清水沖十次以上去除洗滌劑殘留,然后沖去離子水3次,再用雙蒸水1次,倒置于器皿柜中晾干。關上器皿柜的門防塵。
五、 培養(yǎng)液、試劑等相關操作規(guī)則
1. 從冰箱取放物品動作要迅速,關門時要檢查門是否關好。按類別存放試劑。
2. 培養(yǎng)液母液是公用,由值日生負責配制,長期存放于-20℃。使用時按比例加入血清配成培養(yǎng)液工作液,打開使用后的母液存放于4℃,要注意避免污染。發(fā)現(xiàn)4℃存放的培養(yǎng)液量不足時及時從-20℃中預解凍,若-20℃中已沒有儲備,請及時通知值日生。
  3. 分裝好的血清長時間保存于-20℃,使用前放于4℃預解凍。從-20℃取用血清者需登記,并在血清管上簽上使用者名字,若使用別人解凍的血清需征得同意以免耽誤他人實驗。按需解凍,避免反復凍融。
  4. 原則上解凍好的血清應全部配成含血清的培養(yǎng)基備用,若有剩余,則暫存于4℃并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清,以免交叉污染。
六、 值日生工作職責
1. 每周值日生時間從周六開始,至下周五結束。
  2. 值日周開始時需做的事情:在周六、日或之前準備好滅菌的槍頭、離心管、干烤好的玻璃器皿,供未來一周的使用。配制消毒用的75%的酒精,制作酒精棉球,給細胞房內添加足夠的95%乙醇供酒精燈使用。
  注: 新離心管滅菌前,先用去離子水過2-3次,再用雙蒸水沖1次,烘干后用牛皮紙包好、滅菌。
  注:75%的酒精可用750ml 95%的酒精加去離子水至950ml配制而成。
  3. 值日周內每天需做的事情:開大紫外燈消毒細胞房15-30min;將裝滿浸泡物品的塑料桶拎出細胞房送洗,并將空桶放回細胞房;更換垃圾袋;檢查培養(yǎng)箱內水量是否足夠;檢查滅菌物品的儲備情況,以便及時補充;檢查培養(yǎng)液母液、血清、酒精等公用試劑的儲備情況。
  4. 值日周結束前需完成的事情:星期五或前后一天內打掃細胞房。包括拖地,擦桌子、吊柜、清潔和整理抽屜,擦超凈臺、冰箱及桌上的儀器,給水浴鍋加水或換水,洗細胞房的實驗服和拖鞋,紫外消毒細胞房。切記給培養(yǎng)箱換MilliQ水,保證水質清潔!
  注:若上周值日生及時給培養(yǎng)箱內水槽加足水,根據(jù)經驗未來一周內培養(yǎng)箱不會干水,但值日生仍應經常檢查,以便及時發(fā)現(xiàn)異常情況。
  5. 每2周清潔一次培養(yǎng)箱:先將培養(yǎng)箱中的物品取出暫存于超凈臺內,對于比較敏感的細胞可以暫存于404細胞房的培養(yǎng)箱;將培養(yǎng)箱內的不銹鋼板取出,包括4塊橫板和左右2塊立著的架子,用酒精棉球清潔鋼板和培養(yǎng)箱內壁;打開培養(yǎng)箱清潔內壁時動作要迅速,避免長時間敞開門使得大量不潔凈空氣進入,縮短過濾器的壽命;用紫外燈照射培養(yǎng)箱內部15min,手提紫外燈放入培養(yǎng)箱前要用酒精棉擦拭干凈。
  6. 配制培養(yǎng)液母液:培養(yǎng)液有RPMI1640和DMEM兩種,配方見404公共配液房;配制培養(yǎng)基要提前干烤量筒、燒杯、250ml血清瓶,濕熱滅菌濾器、血清瓶瓶蓋,國產濾膜使用前用MilliQ水浸泡15min以上或過夜。
七、常用溶液的配制
1. RPMI 1640:干粉一包,碳酸氫鈉 2.0g,Hepes 2.38g,青霉素100u/ml,鏈霉素100ug/ml,攪拌1-2小時后調節(jié)pH值至7.2,定容至1L,過濾滅菌分裝;
  2. DMEM:干粉一包,碳酸氫鈉 3.7g,Hepes 2.38g,丙酮酸鈉110mg,青霉素100u/ml,鏈霉素100ug/ml,攪拌1-2小時后調節(jié)pH值至7.2,定容至1L,過濾滅菌分裝;
  3. 胰蛋白酶:用D-Hanks配制,濃度為0.25%(W/V), 攪拌2小時后調節(jié)pH值至7.2,定容至1L,過濾滅菌分裝;
  4. 青霉素:80萬單位/瓶,加入4ml PBS,配成濃度為200000U/ml的母液;
  5. 鏈霉素:按質量體積比配制,用PBS配成濃度為200mg/ml的母液。

 

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